簡(jiǎn) 介:microRNA (miRNA) 是一類(lèi)長(zhǎng)度約22 nt的非編碼單鏈RNA,廣泛存在于動(dòng)物、植物中,具有基因表達(dá)調(diào)控的功能,與生物體的生長(zhǎng)、發(fā)育、癌癥的發(fā)生等現(xiàn)象息息相關(guān)。
目前通用的miRNA逆轉(zhuǎn)錄和定量PCR方法(Stem-Loop莖環(huán)法),原理如下:
技術(shù)優(yōu)勢(shì)
(1) 采用miRNA專(zhuān)用提取試劑盒(進(jìn)口產(chǎn)品)有效從植物、動(dòng)物中提取miRNA,然后采用莖環(huán)法進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,Taqman探針?lè)ㄟM(jìn)行定量PCR分析,從而提高miRNA檢測(cè)特異性和靈敏度。
(2) 本公司擁有miRNA定量檢測(cè)的多種內(nèi)參,如:U6,SNORD48,SNORD44等多種Human, Rat和Mouse內(nèi)參,有效的提高了miRNA定量PCR精確性。
客戶(hù)須知:
miRNA定量PCR |
周期 |
最終提供客戶(hù)資料 |
miRNA定量PCR |
10-14個(gè)工作日(視樣品和基因數(shù)目而定) |
詳細(xì)實(shí)驗(yàn)總結(jié)報(bào)告(包括RT引物、擴(kuò)增引物序列、microRNA提取、逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)、擴(kuò)增曲線(xiàn)、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、樣品重復(fù)結(jié)果、相對(duì)表達(dá)分析結(jié)果,統(tǒng)計(jì)分析等) |
案例:
1. 對(duì)于miRNA家族成員設(shè)計(jì)不同的莖環(huán)逆轉(zhuǎn)錄引物,從而提高miRNA檢測(cè)的特異性。
下面這個(gè)實(shí)驗(yàn)從hsa-let家族進(jìn)行設(shè)計(jì)不同的逆轉(zhuǎn)錄引物,而且對(duì)定量PCR正向引物進(jìn)行優(yōu)化,從而有效區(qū)分hsa-let檢測(cè)的特異性,如下圖所示:
2. 血清中miRNA表達(dá)分析,從中找到與疾病有關(guān)的miRNA分子標(biāo)志物,以及miRNA轉(zhuǎn)移情況。
血清中miRNA定量一直是目前研究的熱點(diǎn)之一,由于血清中雜蛋白較多,miRNA含量較低,眾多科研人員或公司很難做好血清miRNA定量分析。下面該實(shí)驗(yàn)從正常以及某患者血清中,分離miRNA,從中對(duì)hsa-200C-3P、hsa-200C-3P以及hsa-145-5P表達(dá)水平進(jìn)行分析,從而分析miRNA表達(dá)與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)中引入了外參cel-miR-39,準(zhǔn)確標(biāo)準(zhǔn)化了血清miRNA提取準(zhǔn)確性以及定量數(shù)據(jù)分析的精確性。
客戶(hù)提供:
樣品類(lèi)型 |
組織樣本 |
細(xì)胞樣品 |
樣品需要量 |
≥200 mg
|
≥5-10×106個(gè)(相當(dāng)于六孔板長(zhǎng)滿(mǎn)后的一個(gè)孔細(xì)胞量) |
取樣和保存環(huán)境 |
新鮮;-80℃凍存或存于組織保存液中;物種及基因名稱(chēng)(最好提供NCBI中的基因序列號(hào)) 物種及miRNA名稱(chēng)(最好提供miRNA database序列號(hào),其參考網(wǎng)址:http://www.microrna.org/) |
新鮮;-80℃凍存或存于組織保存液中);物種及基因名稱(chēng)(最好提供NCBI中的基因序列號(hào)) 物種及miRNA名稱(chēng)(最好提供miRNA database序列號(hào),其參考網(wǎng)址:http://www.microrna.org/) |
運(yùn)輸 |
杭州市內(nèi)干冰上門(mén)取樣; 外地客戶(hù)干冰快遞運(yùn)輸; 組織保存液,冰袋運(yùn)輸 |
杭州市內(nèi)干冰上門(mén)取樣; 外地客戶(hù)干冰快遞運(yùn)輸;
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*(經(jīng)本公司評(píng)估后,實(shí)驗(yàn)沒(méi)有結(jié)果,不收取任何費(fèi)用)